DNA测序是测定DNA核苷酸序列的基本技术。通过DNA测序才能了解DNA克隆和PCR扩增片段的精确序列变化,是在pcr-sscp、DGGE等技术筛查出突变之后确定其突变性质所必须的过程。正是测序技术的不断改进才使测定人类全基因组的核苷酸序列成为可能。
Sanger和maxam-gibert于1980年因创建DNA测序方法而获诺贝尔化学奖。测序方法最初是由Gibert创建的用特异碱基化学修饰和切割的化学方法,随后由Sanger创建了双脱氧核苷酸酶促反应终止法。后来主要应用Sanger的双脱氧核苷酸末端终止法,以待测DNA为模板,在DNA聚合酶合成新链的过程中,分别掺入4种2,3-双脱氧核苷酸dATP,dGTP,ddctp,ddttp),使掺入的dNTP无法与下一个单核苷酸形成磷酸二酯键而终止DNA链的延伸;在4种反应体系中将产生不同长度的DNA片段,分别在变性凝胶电泳中列,20世纪90年代在此原理的基础上发展了自动测序仪,应用不同荧光标记的4种2,3-双脱氧核苷酸掺入DNA酶促合成反应中,经一个通道毛细管凝胶电泳,激光捕获4种不同波长的荧光其信息通过计算机处理直接标出碱基序列。
The End
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